Системы CRISPR-Cas обеспечивают защиту прокариот от бактериофагов посредством встраивания коротких фаговых последовательностей – спейсеров – в CRISPR-кассету в геноме клетки. Это позволяет клеткам оперативно распознать вирус при повторных заражениях. Для детектирования новых спейсеров используют ПЦР с праймерами к участкам, фланкирующим сайт встраивания спейсера. Появление удлинённого продукта ПЦР свидетельствует о появлении нового спейсера. Поскольку формирование иммунитета происходит с низкой эффективностью, в ПЦР всегда присутствует короткий продукт, соответствующий исходной CRISPR-кассете. Стандартная ПЦР не позволяет детектировать спейсеры, интегрированные менее чем в 5% CRISPR-кассет. В статье предложена супПЦР (супрессорная ПЦР) с чувствительностью, превосходящей чувствительность стандартного метода в 10 раз.Статья опубликована в журнале Biochemical Society Transactions.

Читать статью