Система CRISPR/Cas9 является революционным инструментом для точного редактирования генома в различных типах клеток. Наиболее перспективным для терапевтического применения и при этом высоко эффективным при редактировании генома методом доставки Cas9 в клетки является доставка рибонуклеопротеиновых частиц (РНП). Однако, для получения РНП требуется большое количество высокоочищенного белка Cas9.

Команда ученых разработала эффективный и простой метод получения рекомбинантного белка SpCas9. Для повышения эффективности сворачивания белка при экспрессии в бактериальных клетках, к последовательности, кодирующей SpCas9, была добавлена последовательность Small Ubiquitin Like Modifier (SUMO). В результате авторам удалось получить около 4 мг высокоочищенного препарата SpCas9 из литра бактериальной культуры.  При оценке эффективности геномного редактирования была подтверждена высокая активность полученного РНП как при негомологичном соединении концов, так и при гомологичной рекомбинации.

Также над исследованием работали специалисты из Института молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН; медико-биологического факультета Российского национального исследовательского медицинского университета имени Н. И. Пирогова; Института высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН.

Читать статью