PpCas9 из Pasteurella pneumotropica – малоразмерный Cas9 белок активный в клетках человека

Nucleic Acids Research / IF 11.2 / Q1
ИБГ РАН
PpCas9 из Pasteurella pneumotropica – малоразмерный Cas9 белок активный в клетках человека

CRISPR-Cas9 системы – защитные системы прокариот, которые сегодня широко используются в геномной инженерии. Их работа основана на действии Cas9-нуклеаз - белков, в комплексе с направляющими CRISPR-РНК способными специфически узнавать молекулы ДНК за счет комплементарного спаривания и вносить в них двунитевые разрывы. Использование CRISPR-РНК различной последовательности позволяет вносить целевые разрывы в геном эукариотических клеток, позволяя осуществлять его редактирование.

В этой статье мы охарактеризовали две Cas9 нуклеазы: DfCas9 из Defluviimonas sp.20V17 и PpCas9 из Pasteurella pneumotropica. Это две малоразмерные Cas9 нуклеазы, относящиеся к системам II-C типа. Оба белка оказались активны in vitro, но только PpCas9 способен разрезать ДНК в клетках человека и потенциально может использоваться для генетической инженерии. Для разрезания ДНК PpCas9 требует относительно короткий PAM 5’-NNNNRTT-3’, а малый размер нуклеазы позволяет упаковывать всю CRISPR-PpCas9 систему в одиночный AAV вектор.

Проверка эффективности PpCas9 и его специфичности требует проведения дополнительных исследований, однако, уже сейчас можно рассматривать этот белок как перспективный для применения в биотехнологии и медицине.

Читать статью